• 書名生化学的実験法
• 書名ヨミセイカガクテキジッケンホウ

• 著者名金谷晴夫, 藤田善彦編
• 著者ヨミカナタニ，ハルオ

• 叢書名実験生物学講座
• 叢書番号4

• ISBN4621027794

• 出版地東京
• 出版者丸善
• 出版年1983.7

• ページxvi, 353p
• サイズ22cm

• 注記執筆担当: 新垣尚捷ほか
  各章末:文献

• 件名生物学 -- 実験
  分析化学
  生化学

• 内容〔Ｉ〕高分子のためのクロマトグラフィー
  １．アフィニティクロマトグラフィー
  １・１　アフィニティ吸着体の作製
  固定化されるリガンドの検討；不溶性担体の選択；リガンドの固定化
  １・２　操作方法
  固定化されたリガンドの定量；カラムの作製；吸着；溶出；ゲルの再生；ゲルの保存；結果の検討
  1・3　アフィニティクロマトダラフィーの適用
  酵　素；タンパク質；抗原，抗体；糖複合体；核酸；細胞；群特異性アフィニティクロマトグラフィー；　疎水性クロマトダラフィー；共有結合クロマトグラフィー
  ２．クロマトフォーカシング
  ２・１　原理
  ２・２　クロマトフォーカシングの実験法概要
  ２・３　pH範囲の設定と交換体の選択
  ２・４　開始緩衝液
  ２・５　試料液
  ２・６　展開緩衝液
  ２・７　クロマトフォーカシンダの展開
  ２・８　交換体の再生
  ３．高速液体クロマトグラフィー
  ３・１　基礎概念
  理論と用語；充填ゲルの条件
  ３・２　装置
  高圧ポンプ；圧力計；サソプルインジェクター；プレカラム；カラム；検出器；配管部品；その他
  ３・３　実験条件の設定
  溶離液の組成；pH；温度；流速；チャージ量
  ３・４　実験法
  実験操作；実験条件の記録；分子量の算出；実験例
  ３・５　変性剤存在下における高速ゲル鈩過クロマトグラフィー
  〔Ⅱ〕遠心分離法
  ４．密度勾配遠心分離法
  ４・工　密度勾配沈降遠心法
  原理；密度勾配に用いる溶質と溶媒；密度勾配の作製；遠心操作；実験例1：γファージベクターシャロン４のアームの調製；実験例2：１本鎖DNAと２本鎖DNAの分離；実験例3：岡崎フラグメントの解析；実験例4：フィブロインmRNAの精製；実験例5：アロステリックエフェクターによるチミジンキナーゼの会合；その他の実験例
  ４・２　平衡密度勾配遠心法
  原理；CsClとCs2S04の選択；セシウム塩‐試料混液の調製；遠心操作；実験例1：細胞DNAとヘルペスウィルスDNAの分離；実験例2：密度標識DNAの分析；実験例3：DNA相補鎖の分離；実験例4：フィブロイン遺伝子の濃縮；実験例5：λファージの精製
  ５．分析用超遠心法
  ５・１　超遠心法の簡単な理論
  ５・２　分析用超遠心機のセルと光学系
  ５・３純度の検定
  ５・４　沈降係数の測定
  荷電効果，添加塩の影響；沈降係数の濃度依存性；溶媒の粘度，密度：標準状態への換算；偏比容；遠心移動による変形
  ５・５　多成分系の組成比の見積り
  二乗希釈則；Johnston-Ogston効果
  ５・６　分子量の決定
  沈降係数と拡散係数から求める方法；沈降平衡法による方法；不均一性と非理想性
  〔Ⅲ〕電気泳動法
  ６．ゲルスラブ電気泳勳法とSDSゲルスラブ電気泳勣法
  ６・１　ポリアクリルアミドゲル
  ６・２　装　　　置
  ゲル電気泳動装置；その他の装置
  ６・３　ゲルスラブ電気泳動法
  特　徴；通電中の試料タンパク質と緩衝坡成分の挙動；実験法
  ６・４　SDSゲルスラプ電気泳動法
  原理と特徴；分子量の測定；実験法；実験例：光合成細菌のクロマトホア膜タンパク質の分析
  ７．等電点電気泳動法
  ７・１　原理
  ７・２　両性担体
  ７・３　密度勾配等電点電気泳動法
  等電点電気泳動カラム；試料液；泳動坡のカラムヘの充填；通電；分画；タンパク質量の測定；主な問題点と対策；実験例
  ７・４　ゲルディスク等電点電気泳動法･
  電気泳動装置；ゲルディスクの作製；試料坡，保護液および電極液；通電；ゲルの取り出しとpH勾配の測定；　タンパク質の染色；実験例：ラットの血清タンパク質と肝臓の水溶性タンパク質の分析
  ７・５　ゲルスラブ等電点電気泳動法
  ゲルスラブの作製；電気泳動；その他の操作
  ８．ゲルディスク等速電気泳勳法
  ８・１　原理
  ８・２　実験条件
  先導液；終局液；両性担体の量とpH
  ８・３　実験法
  ゲルディスクの作製；試料液の調製；電気泳動
  〔Ⅳ〕分光分析法
  ９．吸収分析
  ９・１　Beer の法則に基づく定量
  ９・２　濁度による定量
  ９・３　分光光度計の種類
  シングルビーム分光光度計；ダブルビーム分光光度計；二波長分光光度計と多波長分光光度計
  ９・４　生体試料の吸収スペクトル測定
  不均一系スペクトル測定の基本問題；不均一系測定用分光光度計；平滑効果と多重反射効果
  ９・５各種測定法
  差スペクトル；二波長法；低温スペクトル；微分スペクトル
  10．蛍光分析法
  10・１　定量分析
  装置の概要；装置の性能に由来するもの；測定条件に由来するもの；試料およびその調製法に由来するもの；測定感度の改善
  10 ･ ２　分光学的分析
  蛍光（発光）スペクトル；蛍光励起スペクトル；蛍光量子収率；蛍光寿命；偏光度スペクトル
  10・３　蛍光ブローブの使用法
  10・４　時間分解能
  10 ･ ５　マイタロコンピュータの利用
  11．レーザーラマンスペクトル法
  11 ･ １　ラマソ効果の概説
  11・２　ラマソスベクトルの測定法
  11・３　ラマソスベクトルの測定例
  生体内色素分子の共鳴ラマンスペクトル；タンパク質のラマンスペクトル；核酸のラマンスペクトル；眼球のラマンスペクトル
  12．特殊操作
  12・１　低温吸収スペクトル
  装置；実験例；測定後の処理
  12・２　ストップドフロー法
  裝置；分光測定；実験例：クラミドモナス変異株のチトクロムbの酸素との反応性
  12 ･３　閃光分光法
  ノイズ対策；加算平均；フィルター；蛍光対策；実験例：P 700 の定量
  〔Ｖ〕特殊分析
  13．電子スピン共鳴法
  13 ･ 1　スピンラベル法
  スピンラペル法とは；スピンラベルのESRスペクトル；スピンラベルした生物試料測定上の注意；スピンラペル試薬；スピンラベル法を用いた生体膜の研究：実験例と簡単なスペクトルの解析
  13・２　低温ESR
  低温ESRの問題点；実施例
  14．核磁気共鳴法
  14・１　必要とされる試料の量および状態
  14・２　NMRロックと化学シフトの基準
  14・３　試料温度
  14 ･４測定条件
  14・５　intact 生体試料から得られた結果の解析
  14・６　実　　験　　例
  15． アミノ酸分析
  15・１　分析用試料の前処理
  タンパク質，ペプチド；生体試料
  15・２　分析用試料の調製
  塩酸加水分解；特殊アミノ酸の定量；新しい酸性試薬による加水分解；アルカリ加水分解
  16．核酸の調製法
  16・1　真核生物（動物）を材料にした核酸調製
  高分子染色体DNAの調製；動物組織全RNAおよびmRNAの調製
  16・２　大腸菌よりプラスミドＤＮＡの調製
  プラスミドDNAの精製：塩化セシウムーエチジウムブロミド遠心法；プラスミドDNA粗抽出液の調製
  16・3　電気泳動用ゲルからのDNA断片の回収
  アガロースゲルからのDNA断片の回収；ポリアクリルアミドゲルを用いた場合のDNAの回収
  17．脂質分析
  17・１　抽出法
  Folch法；Bligh-Dyer法
  17・２　中性脂質
  分離・精製法；主な中哇脂質の分析
  17 ･ ３　リン脂質
  分離・精製法；リン脂質の構成成分の分析；PCおよびPEの調製；スフィンゴリン脂質の調製)
  17・４　糖　脂　質
  薄層クロマトグラフィーによる分析；皷加水分解による糖脂質の構成成分の分析と定量；メチル化分析法による糖の結合部位の解析；グリコシダー岷による糖の結合順序および立体配位（アノマー構造）の解析；液体クロマトグラフィーによる糖脂質組成の分析
  17・５　今後役に立つ特殊分析法
  培養細胞および少量試料よりのスフィンゴ糖脂質の分析；糖脂質基質のRI標識法
  索引